Метод перекрёстного определения группы крови

Перекрестный метод используется как дополнительное подтверждающее исследование при определении группы крови. В процессе типирования используются стандартные эритроциты крови человека. На первом этапе исследования выявляют наличие или отсутствие во взятом биоматериале антигенов А и В (это делают при помощи сывороток или цоликлонов) и затем при определении групп крови перекрестным способом обнаруживают антитела α и β (исследование выполняют стандартными эритроцитами).

Требования к реагентам

Изогемагглютинирующие сыворотки, которые используются во время исследования, должны соответствовать нижеприведенным параметрам:

  • не должны присутствовать признаки заражения микробами, жидкость должна быть прозрачной, без посторонних примесей;

  • должен прилагаться паспорт, где обозначается не только группа, но и титр, срок годности, информация об изготовителе;

  • на упаковке должны быть полоски соответствующего цвета;

  • минимальный титр сывороток составляет 1:32;

  • агглютинация в качественных реагентах должна наблюдаться уже через 15–20 секунд и становится максимально четкой через 2 минуты.

Чтобы избежать ошибок перекрестного метода определения группы крови https://sangvitest.ru/perekrestnyj-metod-opredeleniya-gruppy-krovi/, на производстве сыворотки окрашиваются соответственно группе крови, а сыворотка 0(I) остается прозрачной. Храниться реагенты должны в холодильнике или в прохладном темном месте в герметично закрытой упаковке.

Процесс агглютинации, по которому оценивают результат, может нарушаться под воздействием разных факторов. Например, при очень низкой температуре возникает так называемая холодовая агглютинация – появление характерных сгустков без взаимодействия с соответствующей группой крови.

Солевой раствор, в котором содержатся эритроциты, также должен быть определенной концентрации. Если она снижается, агглютинация не наступает. Для ускорения добавляют десятипроцентный раствор лимоннокислого натрия.

Схема исследования

Алгоритм исследования схож с применением стандартных сывороток, но имеет свои нюансы:

  1. На пластинку, куда были нанесены обозначения, капают 0,1 мл всех сывороток соответствующих групп I, II и III. Всего лаборант использует 6 капель — наносит по две разные серии сывороток, принадлежащих каждой группе крови.

  2. Внизу пластинки также под обозначениями наносятся стандартные эритроциты в объёме меньше в 10 раз – предельно 0,01 мл.

  3. Из емкости с кровью пациента извлекают сыворотку так, чтобы не смешать её с эритроцитами, наливают по 0,1 мл рядом с приготовленными каплями стандартных эритроцитов. Из нижней части пробирки забирают эритроциты пациента и наносят по меньшей (0,01 мл) капле рядом с маркерами стандартных сывороток.

  4. Затем кровь и реагенты необходимо тщательно перемешать, но не смешивать между собой. Для этого используют сухие стеклянные или пластиковые палочки. Пластинку аккуратно покачивают и оставляют минимум на одну минуту с последующими периодическими покачиваниями.

Реакция агглютинации должна быть заметна практически сразу, но рекомендуется оценивать результат не ранее чем через 3–5 минут. Через 3 минуты после смешивания реагентов и крови в капли, где уже видна агглютинация, добавляют по 0,05 мл хлорида натрия.

При оценке результатов учитывают и те реакции, которые наступили в каплях эритроцитов, и те, что проявились в сыворотках:

  • 1 группа – реакция в эритроцитах А (II) и В (III);

  • 2 группа – реакция эритроцитах В (III) и сыворотках В (III), 0 (I);

  • 3 группа – реакция в сыворотках 0 (I), А (II) и эритроцитах А (II);

  • 4 группа – агглютинация в сыворотках 0 (I), А (II) и В (III).

Перекрестный метод определения группы крови, используемый в биологических лабораториях, — обязательное дополнение прямого метода типирования.

Добавить комментарий